Le tableau montre Sainte Anne et sa fille Marie avec l'enfant Jésus. Bien qu'il n'existe aucune peinture directement influencée par le dessin antérieur de Léonard de Vinci "The Burlington House Cartoon", des croquis ont été trouvés au dos de celui-ci suggérant qu'il avait planifié ses idées pour La Vierge et l'Enfant avec Sainte Anne sur le verso du dessin original de ce dessin animé.
La technologie infrarouge utilisée par les experts a trouvé de nombreuses choses au dos du dessin, y compris une tête de cheval et un dessin de Jésus jouant avec un agneau qui ressemblait au point focal de la peinture qui est venue plus tard. La peinture est une huile sur bois et aurait été peinte vers 1503. Les personnages de "La Vierge et l'Enfant avec Sainte Anne" de Léonard de Vinci sont incroyablement proches les uns des autres, montrant le lien étroit que non seulement Marie avait avec l'enfant Jésus mais aussi Sainte Anne.
C'est peut-être pour montrer au spectateur combien il est facile de se rapprocher du Fils de Dieu. Jésus interagissant avec l'agneau plutôt qu'avec les membres de sa famille montre peut-être sa bonté envers tous les êtres vivants. Les agneaux sont souvent utilisés dans les peintures qui se rapportent à Jésus, car l'agneau de Dieu est une tournure de phrase très connue qui vient à la Bible. Une chose très inhabituelle à propos de la peinture est le fait que Marie est assise sur les genoux de Sainte Anne. Bien que Sainte Anne soit la Mère de Marie - ce n'était pas une pratique courante à l'époque.
En fait, à travers l'histoire, les femmes assises sur les genoux d'autres femmes ne sont pas connues pour se produire en toute circonstance. De nombreux érudits se sont disputés sur la signification de cela, mais il est probable que da Vinci souhaitait simplement ajouter un élément de famille humaine à l'image pour montrer les humbles débuts d'où Jésus venait. La Vierge et l'Enfant avec sainte Anne est exposée dans le Lovure et est sans aucun doute l'une de leurs plus belles pièces da Vinci.
Pour cette raison, il y a eu de nombreuses controverses sur la façon dont la peinture doit être nettoyée - voire pas du tout. En 2011, deux membres éminents du personnel ont démissionné de la galerie à cause du nettoyage du tableau. Une fois la peinture nettoyée, elle est devenue beaucoup plus lumineuse, ce qui était évidemment plus facile pour le spectateur, mais il a été avancé que cette luminosité n'était pas ce que Léonard de Vinci avait réellement prévu pour la peinture.
Alors que deux membres du personnel ont démissionné à cause du nettoyage, d'autres membres du personnel et des universitaires ont fait valoir que c'était la bonne chose à faire. L'un des directeurs qui supervisait la restauration était l'un des membres du personnel qui a démissionné, mais depuis que cela s'est produit en 2011, de nombreux critiques se sont prononcés en faveur de la restauration en disant qu'il est plus avantageux que la peinture dure plus longtemps.
